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用RNase III 消化长片断双链RNA制备siRNA库 |
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其他制备siRNA的方法都需要设计和检验多个siRNA序列以便找到一个最有效的siRNA。而用RNaseIII降解长片断双链RNA成为siRNAs库就象制备一份混合有各种siRNAs“混合鸡尾酒”， RNase III的完全降解产物（12—15bp）同样可以诱导专一的基因沉默，效果与化学合成或者是酶法得到的siRNAs相当。该方法是选择200—1000bp的靶mRNA，用体外转录的方法制备长片断双链dsRNA，然后用RNaseIII(或Dicer)酶在体外消化，得到一众siRNAs“混合鸡尾酒”。除掉没有被消化的dsRNA，siRNA混合物就可以直接转染细胞。由于siRNA混合物中有许多不同的siRNAs，通常能够保证目的基因被有效地抑制。主要优点：1. 可以跳过检测和筛选有效siRNA序列的步骤，避免化学合成siRNA的昂贵费用，siRNA表达载体的繁琐劳动，以及为找到一个有效的siRNA 序列所必经的漫长的筛选过程，为研究人员节省时间和金钱（通常用RNAse III通常比用Dicer要便宜），是一种比较简单粗放、快速、性价比很高的方法。2. 可能引发非特异的基因沉默，特别是同源或者是密切相关的基因。现在多数的研究显示这种情况一般不会造成影响。最近一篇关于RNase III制备的siRNAs和相关的R
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