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用RNase III 消化长片断双链RNA制备siRNA库 |
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RNA结合蛋白的文章同样证实没有非特异基因沉默的发生。在除了哺乳动物细胞以外的其他系统中，可以通过Dicer酶复合物消化长片断RNA双链，得到针对同一个靶基因多个位点的siRNAs群，从而特异的抑制目的基因的表达。这些结果提示存在某种适当的机制来维护抑制反应的高度专一性。Ambion公司曾经用它的SilencersiRNA Cocktail Kit(RNase III)试剂盒成功关闭几个基因，包括c-fos, GAPDH, La, ß-actin, 和Ku-70。3. RNase III能够消化各种来源的双链RNA。 4. RNase III 得到的12-15bpsiRNAs库能够非常有效的抑制基因的表达。在这个siRNAs库中既有一些有效的siRNAs分子，也有很多无效的siRNAs部分。5. 导入这种方法制备的siRNA库，并没有表现比用化学合成法制备特定的siRNAs更高的毒性或者是对基因表达的非特异效应。因而，采用RNase III 制备siRNAs混合库可以成为有别于传统方法的制备siRNA的另一种好办法。 适用：1.快速经济地研究某个基因功能缺失的表型2.只需要运用RNAi 技术作为遗传工具，快速得到RNA干扰结果，而无需详细研究siRNA具体信息的研究人员不适用：1.长时间的研究项目2.需要一个特定的siRNA，特别是基因治疗
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