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    Southern印迹杂交

    胶片中,在254nm短波透射灯下拍照,加橙-滤色镜,使用高速一次成像胶片,光圈f4.5,曝光20-40s。 (2)硝酸纤维素膜吸印。 [1]将胶片切成合适大小,切去右上角作为记号。 [2]将胶片放进盛有变性缓冲液(1.5mol/L NaCl,0.5mol/L NaOH)的盘中轻晃15min。 [3]换到中和缓冲液(1mol/L Tris-HCl,pH8.0,0.15mol/L NaOH)的盘中轻晃30min。 [4]裁一张硝酸纤维素膜、2-4张3mm滤纸和一些吸印纸(可用卫生纸),都与胶的大小相同(硝酸纤维素膜和吸印纸不能比胶大,否则易形成旁路)。先将硝酸纤维素膜浸到水中,再放入10×SSC缓冲液,接触胶和硝酸纤维素膜时都要戴手套操作。 [5]平盘上放一块比胶大的平板上面铺一张3mm滤纸,起灯蕊作用,盘中加入少量10×SSC缓冲液(2.5cm厚),不能没过平板,使3mm滤纸充分饱和。 [6]将胶倒扣在3mm滤纸上。 [7]浸湿的硝酸纤维素膜在胶上,对齐。铺膜时从一边逐渐放下,防止产生气泡,有气泡时,可用吸管赶出,不能让膜与胶下的滤纸直接接触。 [8]膜上放一张3mm滤纸,不能与胶接触。 [9]上面加吸印纸及重物(500g左右)。 [10]通过滤纸的灯芯作用,平盘中的缓冲液就会通过胶上移,从而将DNA吸印到膜上,及时更换浸湿的吸印纸,在室温下转印过夜。 [11]清除上面的东西。用镊子将膜取出,在6×SSC中洗一下。 [12]自然干燥,80℃烤2h。 [13]这是的膜就可进行杂交,或室温密封保存。
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