菌落原位杂交（colony in situ hybridization）

    菌落原位杂交（colony in situ hybridization）。是将细菌从一主平板转移到硝酸纤维素滤膜上，然后将滤膜上的菌落裂菌以释放出DNA，将DNA烘干固定于膜上与32P标记的探针杂交，放射自显影检测菌落杂交信号、并与主平板上的菌落对位。实验步骤如下： ①将硝酸纤维素滤膜置于含抗生素的平皿琼脂培养基上，用无菌牙签挑取单菌落种于滤膜和主琼脂平板上，排列成方格栅，膜和板上菌落位置相同。 ②培养细菌至产生1-2mm大小的菌落。 ③在一块平皿中置4张滤纸，用10%SDS浸透，倒掉多余液体，将带有菌落的滤膜取下轻轻置于滤纸上，菌落面在上，注意防止滤膜底面存有气泡。 ④5min后，将滤膜转至用变性溶液（0.5mol/L NaOH,1.5mol/LNaCl）浸湿的滤纸上，放置10min。 ⑤将滤膜转至中和溶液（1.5mol/L NaCl, 0.5mol/L Tris-HCl pH8.0)浸湿的滤纸上，放置10min，重复中和一次。 ⑥将滤膜移至用2×SSPE溶液浸过的滤纸上，放置10min，SSPE配成20×贮备液：3.6mol/L NaCl,0.2mol/L NaH2PO4(pH7.4)，20mmol/L EDTANa2（pH7.4)。 ⑦将滤膜用滤纸吸干，80℃真空烘干2h。
    你还没注册？或者没有登录？

    如果你还没注册，请赶紧点此注册吧！

    如果你已经注册但还没登录，请赶紧点此登录吧！

设为首页 | 加入收藏 | 广告服务 | 友情链接 | 版权申明