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    基因分离克隆的方法

    1 基因芯片技术分离目的基因生物芯片是高密度固定在固相支持介质上的生物信息分子的微列阵。列阵中每个分子的序列及位置都是已知的,并按预先设定好的顺序点阵。基因芯片是生物芯片的一种,其上固定的是核算类物质,主要用于DNA、RNA分析。分为DNA芯片和微点阵两种。分离目的基因是是指从基因组中发现或找出某个目的(标)基因。目前是通过①比较不同物种之间,或同一物种不同个体之间;或同一个体在不同生长发育是期或不同环境条件下基因差异表达(基因表达平行分析)来实现的。采用基因芯片技术进行基因差异表达研究可以通过杂交直接检测到细胞中mRNA的种类及丰度,与传统的差异显示相比具有样品用量小,自动化程度高,被检测目标DNA密度大及并行种类多等优点。②利用同源探针从cDNA或EST微列阵中筛选分离目的基因。目前有DNA芯片、cDNA芯片两种。其基本步骤包括:基因芯片的制备、靶样品制备、杂交与检测、目的基因得分离并获得全长。2 基因文库技术分离目的基因基因文库指某一生物类型全部基因的集合。这种集合是以重组体的形式出现。某生物DN*段群体与载体分子重组,重组后转化宿主细胞,转化细胞在选择培养基上生长出的单个菌落(或噬菌斑,或成活细胞)即为一个DN*段的克隆。全部DN*段克隆的集合体即为该生物的基因文库。其类型很多,如可分为基因组文库与cDNA文库、克隆文库与表达文库,按载体分有智力文库、噬菌体文
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