琼脂糖凝胶电泳

    琼脂糖凝胶电泳可用于分离、鉴定和提纯DN*段。本法操作简单、迅速，能分辨其它方法不能分开的DN*段混合物，分开的DNA可用低浓度的萤光染料（0.5μg/ml溴化乙锭）染色，在紫外灯下直接观察检测少至1ng的DNA。DNA通过琼脂糖凝胶的迁移率取决于以下参数：①DNA分子的大小   线状双链DNA分子通过凝胶的速率与其分子量的常用对数成反比。据此用已知分子量的标准物质和待测分子量的DN*段同时电泳，比较其电泳速率，即可求出待测片段的分子大小。②琼脂糖浓度：   给定大小的DN*段，以不同速度通过不同浓度的琼脂糖凝胶。因此利用不同浓度的凝胶，可分辨范围广泛，大小不同的DN*段。③DNA构型   相同分子量的闭环（Ⅰ型），开环（Ⅱ型）和线状（Ⅲ型）DNA，以不同速率通过凝胶，一般情况下，迁移率Ⅰ型>Ⅲ型>Ⅱ型。④应用的电压   在低电压时，线状DN*段的迁移率与所用电压成正比。但是电压增高时，大分子量DN*段迁移率的增大是不同的，因此琼脂糖凝胶的有效分离范围随电压增大而减小。为了获得DN*段的最大分辨力，凝胶电泳时电压不应超过5V/cm。
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