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生物样品往往是非常复杂的生物分子混合体,除少数特殊样品外,一般不能直接与芯片反应,必须将样品进行生物处理。从血液或活组织中获取的DNA/mRNA样品在标记成为探针以前必须扩增以提高阅读灵敏度,但这一过程操作起来却有一定的难度。比如在一个癌细胞中有成千上万个正常基因的干扰,杂合癌基因的检测和对它的高效、特异地扩增就不是一件容易的事。因为在一般溶液中PCR扩增时,靶片段太少且不易被凝胶分离,故存在其它不同的DN*段与其竞争引物的情况。美国Mosaic Technology公司发展了一种固相PCR系统。此系统包含两套引物,每套都可以从靶基因两头延伸。当引物和DNA样品及PCR试剂相混时,如果样品包含靶序列,DNA就从引物两头开始合成,并在引物之间形成双链DNA环或"桥"。由于上述反应在固相中产生,因而避免了引物竞争现象,并可减少残留物污染和重复引发。 根据样品来源、基因含量、检测方法和分析目的不同,采用的基因分离、扩增及标记方法各异。为了获得基因的杂交信号必须对目的基因进行标记。标记方法有荧光标记法、生物素标记法、同位素标记法等。目前采用的最普遍的荧光标记方法与传统方法如体外转录、PCR、逆转录等原理上并无多大差异,只是采用的荧光素种类更多,这可以满足不同来源样品的平行分析。 样品制备的常用试剂:对于检测表达的芯片,样品制备通常涉及(m)RNA的纯化 < 1 > < 2 >
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