高压电泳技术

纸6．玻璃喷雾器7．高压电泳仪8．聚乙烯膜等（三）操作方法1．剪纸剪适当大小滤纸，一般为60cm×10cm。2．点样点样的位置取决于样品的性质和缓冲液的pH，如不明确泳动方向，则点中线处。核苷酸在pH2～5均带负电荷，点靠负极一些。量为50μg～100μg，要求分离后每个斑点在5μg以上，否则在紫外灯下很难检查出来。点样时，样品越少越好，样品剂量较大时，可边点边用吹风机吹干，分数次点。注意勿伤纸面，不要把纸刮毛或弄皱。3．电泳以0.05Mol/L pH4.85柠檬酸缓冲液，用玻璃喷雾器将滤纸喷湿，然后将喷湿的滤纸夹在二滤纸之间，以吸去多余的液体。将湿滤纸夹在两张聚乙烯膜之间，该膜使滤纸与冷却板绝缘，将此“夹层”夹在两块冷却板之间，旋紧冷却板的螺丝。在滤纸两头与电极槽缓冲液之间用数层滤纸搭桥，将电泳仪上的安全盖盖好，把冷却板上入水孔用橡皮管连上。将电表头电压调至4 000V，此时电流为28mA~30mA，相当于电势差66.6V/cm，电流2.8mA/cm~30mA/cm，通电20min，断电。迅速取出滤纸，吹干。（四）结果判定用紫外灯（波长260nm）观察滤纸上的核苷酸分离情况。参照核苷酸的移动位置，可以确定结合物（样品）中有何种核苷酸。也可以根据实验条件，先确定各种标准核苷酸的迁移率作为分析的依据。
< 1 > < 2 >

设为首页 | 加入收藏 | 广告服务 | 友情链接 | 版权申明