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原位聚合酶链式反应(in situ PCR)和原位反转录聚合酶链式 |
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(一)、仪器设备 英国Thermo Hybaid原位PCR仪。 (二)、操作流程 1、原位PCR步骤 1)预处理: (1)切片常规脱蜡; (2)0.2mol/L HCl处理10min; (3)5μg/ml蛋白酶K消化组织37℃10min; (4)Nase消化组织37℃ 30min; (5)梯度酒精脱水,室温干燥。 2)原位扩增: (1)切片滴加特异性序列引物30μLPCR扩增反应液,覆盖硅化盖玻片,石蜡油封边; (2)PCR热循环:94℃,1min;55℃,1min;72℃,1.5min,共25~30个循环,72℃延伸10mi < 1 > < 2 >
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