原位聚合酶链式反应（in situ PCR）和原位反转录聚合酶链式

in；（3）氯仿洗去盖玻片，4％多聚甲醛后固定10min，梯度酒精脱水，干燥。 3) 原位杂交：（1）加地高辛标记探针的杂交液，98℃变性10min，-20℃退火5min，42℃杂交过夜。（2）杂交后用2×SSC洗涤10min，3次，1×SSC洗涤10min，3次；（3）缓冲液洗涤10min，3次；（4）加碱性磷酸酶标记的羊抗地高辛抗体复合物，37℃，2h；（5）缓冲液洗涤5min，3次；（6）NBT、BCIP暗处显色，镜下控制，终止显色。（7）常规脱水：透明、封固。 2、原位RT-PCR步骤 1）预处理：（1）蛋白酶K(0.3mg/mL) 54℃消化20min，蒸馏水洗；（2）95℃加热3min，灭活残存的蛋白酶。 2）原位扩增：（1）在有RNA酶抑制剂存在的条件下，用随机六聚物进行逆转录反应；（2）用热启动法进行PCR扩增。标本加热至75℃时加上反应液，覆以盖玻片，四周用指甲油密封。然后将温度升至95℃，2min。再将热循环仪设定为95℃，45s，55℃，1min和75℃，45s，共26次循环；（3）扩增结束后，在80℃烤15min～30min。 3）原位杂交：（1）杂交前标本95℃加热3min；（2）加上杂交液，湿盒内50℃过夜；杂交液组成：25％硫酸葡聚糖，2×SSC，50％甲酰胺，0.33mg/ml变性的鲑鱼精子DNA，每0．5mL杂交液内含生物素标记探针1ng。（3）扩增的β-肌动蛋白和IL-6用DAKO检测试剂盒K600(链霉卵白素，生物素标记的碱性磷酸酶和硝基四氮唑蓝)检测。阳性反应呈紫色。
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