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关键词:蛋白质复性;环糊精;分子伴侣 重组DNA技术为大规模生产目标蛋白质提供了崭新的途径。但人们在分离纯化基因工程表达产物时却遇到了意想不到的困难:很多利用大肠杆菌为宿主细胞的外源基因表达产物如尿激酶、人胰岛素、人生长激素、白介素-6、人γ-干扰素等,不仅不能分泌到细胞外,反而在细胞内聚集成没有生物活性的直径约0.1~3.0μm的固体颗粒棗包含体[1]。这些基因表达产物的一级结构(即氨基酸序列)虽然正确,而其立体结构是错误的,所以没有生物活性。因此,为获得天然状态的目标产物,必须在分离回收包含体后,溶解包含体并设法使其中的目标蛋白质恢复应有的天然构象和活性。这就向生物化学家的蛋白质折叠机制研究提出了新课题。1. 蛋白质复性机制研究 分离包含体并复性蛋白质的操作步骤并不复杂,从破碎细胞开始,然后将细胞匀浆离心,回收包含体后,加入变性剂溶解包含体,使之成为可溶性伸展态,再除去变性剂使表达产物折叠恢复天然构象及活性。但在实际研究中发现,在体外折叠时,蛋白质分子间由于存在大量错误折叠和聚合,复性效率往往很低。究其原因,蛋白质的立体结构虽然由其氨基酸顺序决定,然而伸展肽链折叠为天然活性结构的过程还受到周围环境的影响。 为了有的放矢地开发辅助蛋白质复性的技术,研究工作者 < 1 > < 2 >
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