分子生物学试验方法探讨一－Northern blots 技术

研究RNA的方法有很多种，常用的如核酸保护性分析(NPA)、RT-PCR、Northern blots等等。而Northern blots曾经是应用得最广的技术之一，尽管其分辨率和操作简易性都不如前者，但Northern blots依然是检测、定量mRNA大小及在组织中表达水平的标准方法，既是能直接提供有关RNA完整性、不同的剪接信息及mRNA大小等信息的唯一方法，也是在同一张膜上直接比较同一信息在不同样品中的表达丰度的首选方法。Northern blots的操作步骤相当繁琐，且对RNase污染非常敏感，任一步操作不当都会严重影响分辨率。尽管Northern blots曾经是应用得最广的技术之一，但不同的实验室甚至不同的人往往都会根据自己的条件采用不同的方法。通常我们称《分子克隆》所书的方法为标准方法（Maniatis）。然而优化这个标准方法中的以下几个操作步骤可以使其灵敏度提高10-20倍：探针的选择、膜的选择和转移方法、杂交液的选择、甲醛还是乙二醛的选择、试剂的质量。以下从这些方面分别加以讨论。探针的选择 Northern blots探针的来源有多样性，可以是cDNA、PCR产物、寡核苷酸，也可以是RNA探针。由于双链探针中的反义链与RNA结合后，存在另一链的竞争性抑制，而RNA探针则不存在这个问题；另外RNA: RNA结
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