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生，接这压两张同样大小的滤纸，不可过大以免短路，胶周围用X光片压条。胶应反面朝上因为DNA多在胶的底层。堆积吸水纸。上面放一小玻板，板上加一500 g左右的重物。注意：防止短路3 转膜16---20hrs后，将尼龙膜取下，胶染色，观察转膜效果。将膜用2xSSC浸泡20分钟，滤纸吸干后放在烘箱中烘2hrs（80℃）。待用。三 杂交¨ 杂交炉与杂交管预热至65℃¨ 尼龙膜用2×SSC浸泡配置杂交液ssDNA沸水变性10min，冰浴10min，置冰浴备用Components Volume (ml) NoteddH2O 20.7 50×Denhardts 0.6 P/H stock 8.1 20% SDS (OR 10% SDS) 0.3 (OR 0.6) Total 30 ml for 2 blots. 65℃预热.Add prepared ssDNA （10mg/L） ≥0.3 ml倒入杂交液，加入尼龙膜，65℃预杂交4~5小时（新膜）注意：赶尽膜与膜之间的气泡后把几张膜同时放入杂交管，并用玻棒赶尽膜与管壁之间的气泡，最后加入杂交液，盖好管盖。四 探针标记（for1~2 blots）ddH2O 7 mlMarker 1.5 ml模板DNA 2 ml (about 100 ng)沸水变性8min，冰浴10min，瞬时离心Add Buffer+Primer 7.5 mlAdd dNTPs(-dCTP) 3 mlAdd Klenow (about 1.5U) 1 ml (2U/ml)瞬时离心Add 32p-dCTP 1~2 ml (10~20 uCi per blot)37℃ 水浴≥4小时五 杂交向标记探针的离心管中Add 等体积TE 25 mlAdd 10×体积变性剂（杂交液） 250 ml沸水变性10min，冰浴10min，将变性好的探针加入到杂交液中，混匀，65℃杂交过夜（12~16小时）。六 洗膜1. 2×SSC,0.5%SDS 5min2. 0.1×SSC,0.1%SDS xmin (RT)3. 0.1×SSC,0.1%SDS χmin (65℃) (洗膜过程中不断检测放射性强度直至200~500)滤纸吸干洗液，保鲜膜包好，暗室中压片，根据放射性强度暴光若干天。冲洗X光片。说明：由于做southern的整个过程比较复杂涉及到的试剂也比较多，我这里仅做了个简要的叙述，但基本的实验过程已列举出来了，此过程中的试剂可以根据具体的实验要求适当调整，如果各位有那里不清楚或者那些部分需要具体的介绍，请与我联系，我们共同讨论学习，另外，做杂交的过程中一定要注意防止同位素泄漏，做好个人的防护工作。
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