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质粒、噬菌体等经酶切,电泳;PCR产物经电泳后,常常需要对一些DNA电泳片段进行回收和纯化,用于亚克隆、探针标记等。DNA回收和纯化常用方法有压碎法、低融点琼脂糖法、冻融法等,也有现成的试剂盒供应。一、冻融法1. 紫外灯下仔细切下含待回收DNA的胶条,将切下的胶条(小于0.6g)捣碎,置于1.5ml离心管中;2. 加入等体积的Tris-HCl饱和酚(pH 7.6),振荡混匀;3. -20℃放置5-10min;4. 4℃离心10000g×5min,上层液转移置另一离心管中;5. 加入1/4体积H2O于含胶的离心管中,振荡混匀;6. -20℃,放置5-10min;7. 4℃离心10000g×5min,合并上清液;8. 用等体积酚/氯仿、氯仿分别抽提一次,取上清;9. 加入1/10体积3M NaAc(pH 5.2)、2.5倍体积预冷的无水乙醇,混匀;10. -20℃,静置30min;11. 4℃离心13000g×10min,弃上清,75%乙醇洗沉淀1-2次,晾干;12. 加适量H2O或TE溶解沉淀。二、DNA回收试剂盒(QIAquick Gel Extraction Kit Protocol)1. 紫外灯下仔细切下含待回收DNA的凝胶,置1.5ml离心管中,称重。2. 加入Buffer QG(每100mg凝胶加Buffer QG 300μ < 1 > < 2 >
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