外周血DNA提取技术

ul溶解DNA,置于摇床平台缓慢摇动，DNA完全溶解通常需12-24小时。5. DNA的浓度测定及纯度判定：取DNA溶液用TE液做适量稀释，以TE液作空白对照，在紫外分光光度计上读取A260和A280的光密度值。按下面公式计算浓度： DNA浓度(ug/ul)= A260*50*稀释倍数/1000DNA纯度的判定： A260/A280 比值应介于1.7-2.0之间。 --------------------------------------------------------------------------------方法二：分别采集外周静脉血5ml，2%乙二胺四乙酸二钠(EDTA)抗凝待用(要求采血至分离白细胞之间隔时间在室温下放置不超过2h，4℃放置不超过5h，以防白细胞自溶)。采用NaI提取法提取外周血白细胞基因组。（1）取外周抗凝血（全血）100ul于Ep管中，12000rpm离心12min （2）弃上清，加双蒸水200ul溶解，摇匀20s（3）混匀后加6M NaI溶液200ul，摇匀20s （4）加氯仿/异戊醇（24：1）400ul，即加即摇，摇匀20s，12000rpm离心12min。（5）取上层液350ul，加入另一新Ep管中，加0.6倍体积异丙醇，摇匀20s，室温放置15min，静置后的反应体系15000rpm离心12min，使沉淀紧贴Ep管壁。（6）弃异丙醇，加70％乙醇1ml（不振动），15000rpm离心12min。（7）弃乙醇，敞开Ep管盖，烘干（37℃恒温箱）后，加1xTE溶液30ul，溶解DNA＞12h以上，制成的DNA液-20℃冰箱保存备用。
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