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    Southern 杂交鉴定

    1)  取10ul待测DNA,于一定浓度的琼脂糖凝胶上进行电泳。(20mL,1.0%凝胶,)2) 凝胶用溴化乙锭染色,切掉凝胶四周多余部分,并在凝胶的一角作一记号, 拍照记录电泳结果(拍照时, 凝胶旁放一尺子)。3) 杂交用胶的制备 (做以下步骤两组合一)A.  将凝胶浸没入30mL 0.25mol/L HCl溶液中15min,使DNA脱嘌呤。B.用蒸馏水短暂洗凝胶2次。C.将凝胶浸没入30mL变性液中30min, 使凝胶变性。D.将凝胶浸没入30mL中和液中15min使它被中和。   重复D一次。在制备杂交用胶时准备转移的平台、膜、滤纸等(4、5)。4) 准备DNA从凝胶向膜转移的平台5) 将1张待用尼龙膜和3张厚滤纸切成与待转移胶相同大小,并在尼龙膜一角做一标记。另1张厚滤纸切成与凝胶相同宽度,长度(约18cm)足以达到转移液盒子的底部。准备10 X SSC 转移液。将待用尼龙膜用蒸馏水浸湿后,再浸入10 X SSC 转移液中。6)安装毛细管转移装置A.将长的滤纸放在转移平台的顶部,滤纸两端达到转移盒的底部,做成虹吸桥。B.将8 0mL转移液倒入转移盒内,并湿润滤纸。C.将凝胶背面朝上置于滤纸搭成的桥上,凝胶与滤纸间避免有气泡。D.用保鲜纸封住凝胶四边。E.将浸湿的转移膜置于凝胶的上部,凝胶与膜间避免有气泡。F
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