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无论是从一个胚胎细胞分化为不同的组织器官,或者是从正常的组织突变为肿瘤组织,都可能涉及在同一基因组背景下不同基因的差异性表达。寻找差异表达的基因就有可能揭示细胞分化的机制或者肿瘤的成因,因而也就成为一项热门的技术。 寻找差异表达的基因有不少方法,抑制消减杂交(SSH)是比较有效的一种方法。以Clontech的PCR-Select cDNA Subtraction Kit为例:将样品(tester)和对照(driver)的mRNA分别反转录并合成为双链cDNA后进行酶消化;样品(tester)分为两组,分别加上不同的adaptor1/2;再将两组样品(tester)分别与过量的对照(driver)杂交,两份杂交结果混合,加入过量的对照再进行第二轮杂交;补齐adaptor然后用PCR选择性扩增。由于过量的对照封闭了在样品中共同表达的基因,而在样品中特异表达的基因会被选择性地扩增出来,这些扩增的片断经过克隆、测序后可以进行拼接或者用RACE的方法从已知片断钓全长cDNA,再做进一步的分析。 但是这一系列的操作并不简单,且得到的结果是一些基因片断,还需要进行下一步的拼接或RACE才能得到完整的基因信息,现在介绍一种简化的消减杂交的技术:以Miltenyi Biotec公司的 < 1 > < 2 >
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