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作分子生物学实验,核酸纯化、酶切、克隆算是最基本的步骤了。因为要做定向克隆,通常要作双酶切。为了省时省事儿,我们常常想方设法把两个酶放在一起切。可是事情并非总那么称心如意——两个酶经常在一起闹别扭,不是反应温度不同啦,就是Buffer不同,有时候两个酶切位点连在一起,必须先切一个再切另一个,否则就切不动——因为有的酶除了识别位点之外还需要旁边留有几个碱基,如果正好被切掉了就出问题。于是有人就到处找通用Buffer——其实所谓通用Buffer也只勉强适用于少数几个常用酶,而且往往会出现不是最佳反应条件的问题、星号活力问题——想想看,酶在生物体内精密调控各种反应,不是最适条件当然容易出问题——马虎一下有时就会有莫名其妙的结果,该切的切不动,不该切的切掉了,该连接的连不上,倒霉上一次就能浪费你几个月时间。于是我们一股脑的怨:酶有问题。可是如果两个酶分别切吧,费时间不说,切完一个,还要纯化好半天——就是不跑电泳也得酚氯仿抽提,本来就不多的样品这么一折腾,够呛。幸好如今有了试剂盒,一切都简单了。您别说,这试剂盒虽然花钱,原理也简单,可是用起来就是方便。第一次酶切后,只要5、6分钟可以很方便地快速纯化酶切样 < 1 > < 2 >
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