植物组织RNA提取的难点及对策<%=id%>

    1.酚类化合物的干扰及对策
    目前去除酚类化合物的一般途径是在提取的初始阶段防止其被氧化，然后再将其与RNA分开。
    1.1防止酚类化合物被氧化的方法
    还原剂法、螯合剂法、牛血清白蛋白（BSA）法、丙酮法：
    Guillemant等和Ainsworth认为低pH值（pH5.5）的提取缓冲液可以防止酚类化合物的离子化和进一步的氧化。
    1.2酚类化合物的去除
    通过Li+或Ca2+沉淀RNA的方法可以将未被氧化的酚类化合物去除。与PVP、不溶性PVPP或BSA结合的多酚，可以直接通过离心去除掉，或在苯酚、氯仿抽提时除去［6］。Manning利用高浓度的2-丁氧乙醇（50%）来沉淀RNA，而多酚溶解于2-丁氧乙醇中而被除去。然后用含50%2-丁氧乙醇的缓冲液洗涤RNA沉淀以去除残留的多酚。他认为即使多酚被氧化，其氧化产物仍可以溶解在高浓度2-丁氧乙醇溶液中而被去除，无需再用NaBH4来处理［14］。
    2.多糖的干扰及对策
    用低浓度乙醇沉淀多糖是一个去除多糖效果较好的方法。另一个常用的方法是醋酸钾沉淀多糖法。
    3.蛋白杂质的影响及对策
    Wilcockson利用蛋白质与RNA在高氯酸钠溶液中的溶解度不同将它们分离。在70%高氯酸钠溶液中，RNA的溶解度大于蛋白质的溶解度，因而将大部分蛋白质沉淀下来。接着在离心上清液中加入两倍体积的无水乙醇，这时RNA能沉淀下来而能溶于70%高氯酸钠溶液中的残留蛋白质仍然留在上清液中。这样可以除去绝大部分的蛋白质［17］。
    4.次级代谢产物的影响及对策
    从植物组织中提取高质量RNA的另一个难点是许多高等植物组织尤其是成熟组织能产生某些水溶性的次级代谢产物，这些次级代谢产物很容易与RNA结合并与RNA共同被抽提出来而阻碍具有生物活性的RNA的分离。因不能确定这些次级产物具体是什么物质，所以，目前还没有什么特殊的方法来解决这个问题。

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