基因剔除

旁边的选择基因丢掉。非同源重组也就是随机整合，则会把整个外源DN-段包括已失去功能的待剔除基因序列和两个选择基因，全部插入ES细胞的基因组。此时，在体外培养ES细胞时，在培养液里加入针对两个选择基因的适当的化学物质，就可使随机整合(此时整个外源DNA包括neo和tk基因都被整合)而仍保留着待剔除基因的ES细胞被选择性地杀死；只有发生了同源重组(此时，tk基因不被整合)使待剔除基因被置换或剔除掉的ES细胞，方能选择性地存活下来。然后将这些存活的ES细胞注射进小鼠早期胚胎。由于ES细胞是二倍体细胞，所以已经剔除了待剔除基因的ES细胞是该基因的杂合子，也就是ES细胞的一对同源染色体中只有一条染色体上的等位基因被剔除了。所以这种ES细胞注入小鼠胚胎后产下的小鼠也是该基因的缺失杂合体，需要把同是该基因缺失杂合体的雌雄小鼠交配，从子代中选出该基因缺失的纯合体，其概率为四分之一。这些缺失纯合小鼠可用于研究鉴定被剔除基因的生物功能。
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