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    酵母三双杂交系统

    IRE mRNA在非编码区有21nt的茎环区序列,编码区编码与IRP1特异性结合的蛋白序列。在实验中他们用一质粒表达杂交RNA,含2个MS2 coat protein结合位点和1个IRE。    三杂交系统提供了快速、多用的体内检测RNA-蛋白间相互作用的新方法。与双杂交系统相比,杂交RNA与杂交蛋白有些不同:首先,杂交RNA分子可能不是生理结构,杂交的不同RNA组分对正常结构会有一定影响。但Dhruba的研究表明,局部、相对稳定的结构区如MS2 coat protein,IRP1识别位点等可在体内共存于同一杂交RNA分子中。其次,这些RNA中的茎环区结构相当稳定,RNA只要形成部分正确结构,则足以介导转录激活作用。    象双杂交系统一样,三杂交系统具有广泛的应用。〈1〉应用此系统可分析确定RNA--蛋白作用的精确结构域,甚至单个核苷酸或氨基酸残基。〈2〉用于鉴定和克隆识别结合有重要生理功能RNA(如转录、定位、RNA病毒包装和感染等)的蛋白质,可用于调控的机理研究、疾病的防治以及抗病毒药物的研制开发。〈3〉通过构建杂交RNA库,可筛选与特定蛋白结合的RNA。〈4〉有可能在此基础上发展四杂交系统研究RNA-RNA间的相互作用。
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