基因工程

用的方法是人工合成基因的方法。人工合成基因的方法主要有两条途径：一是以目的基因转录成的mRNA为模板，逆转录成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成双链DNA，从而获得所需要的基因；二是根据已知的蛋白质的氨基酸序列，推测出相应的 mRNA序列，然后按碱基互补配对原则，推测出它的结构基因的核苷酸序列，再通过化学的方法，以单核苷酸为原料合成目的基因，如人的血红蛋白基因胰岛素基因等就是通过这种方法获得的。基因工程的第二步是把目的基因接到某种运载体上，常用的运载体是能够和细菌共生的质粒等，具体做法是：先用限制性内切酶切断目的基因，使其产生相同的黏性末。将切下的目的基因的片段插入到质粒的切口处，现再加人适量的DNA连接酶，质粒的黏性末端与目的基因DN-段的黏性末端就会因碱基配对而结合，形成一个重组DNA分子。如人的胰岛素基因质粒的结合就是通过这种方式实现的。基因工程的第三步是通过运载体把目的基因带入某生物体内，并使它得到表达。在基因工程中常用的受体细胞有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、动植物细胞等。目的基因导入受体细胞后，就可以随着受体细胞的繁殖而复制。基因工程的第四步是目的基因的检测和表达。在基因工程的前三步完成后，在全部受体细胞中，真正能够摄入重组DNA分子的受体细胞是很少的。因此，必须通过一定的手段对细胞中是否导入了目的基因进行检测。检测的方法有很多种，如大肠杆菌的某种质粒具有青霉素抗性基因，当这种质粒与外源DNA组合在一起形成重组质粒，并被转入受体细胞后，就可以根据受体是否具有青霉素抗来判断受体细胞是否获得了目的基因。
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