用PCR、GC发夹及变性梯度凝胶电泳检测突变

　　变性梯度胶凝电泳(DGGE)能够将具有单个碱基差别的DNA分子分离开来。分离以 DNA在溶液中的解链特性为基础。以温度或变性剂浓增高时，DNA分子在不同的区域相对应的解链温度称为基础。解链区域的长度从25个碱基对到数百个碱基对不等，与每一个解链区域相对应的解链温度称为解链温度(Tm)。由于一个DNA链上相邻碱基间的堆积作用在DNA双螺旋的稳定上起着相当重要的作用，因此解链区域的Tm值主要取决于核苷酸的序列。既使是很小的变化也会引起DN*段Tm值的改变，如单碱基替代可引起1.5℃的差异。在DGGE系统中，DN*段在变性剂梯度聚丙烯酰胺凝胶中电泳，凝胶中自上而下所含变性剂浓度呈线性增加。DN*段在进入变性剂某一浓度时，此浓度下DN*段在最低温度解链区域解链(相当于该区域的Tm值)，此时DNA分子成分枝状结构，它使DNA分子在胶中的移动减慢。如果梯度条件选择恰当，因单个碱基变化使不同的DN*段在凝胶中的不同位置分叉，随后DN*段移动减慢，从而使笪DN*段最终分离开来。　　DGGE可以用来检测除最高温度解链区域以外的所有发生单个碱基变化的DN* 段。例如一个DN*段有三个解链区域，其中头两个区域中的碱基变化能够检测到;但是最后一个区域的碱基变化，由于缺乏完全解链区域时依赖序列移动的DN*段，一般不能检测。我们能够利用克隆的DN*段通
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